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天皇这边刚刚消停，德川齐昭又坐不住了。德川齐昭是水户藩的前任藩主，相当于水户藩太上皇。他还有一个身份，是一桥庆喜的亲生父亲。
按照幕府的法律，将军无嗣或者暴卒，由水户藩决定继嗣人选。这算是德川氏的家事，自然该由德川氏说了算，不能由幕府大老独断专行。
德川齐昭带了三个重量级的人物，来到江户兴师问罪。这三个人，分别是水户藩现任藩主德川庆笃（齐昭儿子），尾张藩藩主德川庆胜，福井藩藩主松平庆永。
他们自以为名正言顺，足以扳倒井伊直弼。
可井伊直弼老谋深算，拿出了天皇的诏书。既有天皇的诏书，德川家茂就是合法的将军。
井伊直弼以此质问德川齐昭，是否不承认将军的合法性。
日本等级制度极严，甚于满清。既有天皇诏书，齐昭不敢不承认。虽然天皇是被逼下诏的，但下诏的却是真实的诏书。这就是井伊直弼的逻辑。日本人认死理，齐昭对此也无话可说。
按照《武家朱法度》，大名该来江户的时候不来，是犯罪；不该来江户的时候乱来，也是犯罪。
井伊直弼引用这条法律，惩罚这批大名。他虽然不敢杀德川齐昭，却下令德川齐昭闭门反省，禁止通信；德川庆笃和一桥庆喜停止登城参政；德川庆恕隐退；松平庆永归藩反省。
如此处置，还算是和平的。到了5月，又掀起了一轮大风波。
水户藩武士鹈饲吉左卫门，认为井伊直弼是国贼，召集武士除女干。他甚至沟通了孝明天皇，孝明天皇智商不在线，给水户藩藩主德川庆笃下了密诏，要求有三：
一、要求外藩联合，逼迫幕府解释条约签署之事；二、要求御三家、卿三家和外藩尊王攘夷，推进公武合体；三、刺杀井伊直弼。
外藩得到消息，以长州藩、萨摩藩最为激动。萨摩藩刚刚战败，藩内攘夷派武士又兴风作浪，叫嚣毁约再战。长州藩长期与幕府为敌，历任藩主急躁冒进，甚至打算出兵勤王。
密诏涉及了很多人，谋事不密。不久事泄，井伊直弼震怒。水户藩越过幕府私自结交天皇，违反大忌，严惩。幕府在京都、江户和各藩大开杀戒，牵连武士超过一百多名。
日本近代史上大名鼎鼎的安政大狱，提前爆发了！
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