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狂犬病病毒培养技术研究进展
狂犬病作为一种几乎100%致死***共患传染病,对人类危害已经存在了4000近年,至今仍无有效治疗药物,可行控制方略只有暴露前免疫和暴露后防止。其中暴露前免疫重要是针对动物而言,由于人狂犬病来源于动物,只要动物狂犬病免疫防止有效,可完全控制人狂犬病发生;而暴露后防止重要用于人,由于人一旦被带毒动物咬伤,必要及时进行全程暴露后防止才干防止感染狂犬病病毒。
无论是暴露前免疫,还是暴露后防止,都离不开安全、有效、便宜疫苗。人和兽用狂犬病疫苗发展,都依赖于病毒培养技术不断进步,特别是微载体、发酵技术和无血清培养基广泛应用,把狂犬病病毒增殖滴度提高到了一种新水平,同步减少了生产成本,从而使高质量细胞纯化疫苗逐渐占领市场。
无论是老式体内培养技术,还是当前细胞培养技术,以及新型细胞发酵和生物反映器,当前都广泛应用于狂犬病病毒实验室研究或疫苗生产。本文重要就狂犬病病毒培养技术发展和新技术应用现状综述如下。
1体内培养技术
体内培养技术运用了狂犬病病毒嗜神经特性,具备敏感性好长处,可以提高病毒检测阳性率,并且易于操作,合用于不具备组织培养条件实验室。其中,小鼠脑内接种是实验室最惯用狂犬病诊断和病毒培养技术之一,其她动物如大鼠、羊、兔等,过去重要用于狂犬病神经组织疫苗生产。
禽胚胎培养技术重要是运用鸭胚和鸡胚进行狂犬病病毒培养,如鸡胚传代致弱flury-hep、flury-lep和kelev毒株。
1.1脑内培养技术
小鼠脑内接种是最惯用狂犬病病毒脑内培养技术,最早用于狂犬病野毒株分离培养是在1925年[5]。1955年,该技术开始用于疫苗生产,fuenjalida和pbv),该疫苗曾在南美洲使用了40近年,最后因使用后会引起严重神经综合症而被迫停产[1],但是小鼠脑内接种技术却始终延用至今。当前,该技术已成为病毒分离、毒力测定及中和实验等惯用办法,所用动物普通为小鼠,乳鼠对狂犬病病毒脑内接种敏感性高于幼鼠和成年鼠[6]。小鼠中,以瑞士白化鼠(sissalbino)为一方面品种,该品种小鼠在实验室饲养容易,对狂犬病病毒高度敏感,但迄今尚未发现任何对狂犬病病毒具备遗传抗性小鼠品系,因而也可使用其她品种小鼠。实验室普通不采用野生灰鼠或家鼠,由于其野性较大,人工饲养困难。狂犬病脑内接种实验周期长,普通需观测21天,且成本较高,操作技术性强,鉴于此,有实验室已改用细胞(如小鼠成神经瘤细胞和bhk细胞等)代替小鼠进行实验。
其她脑内培养技术(大鼠、羊、兔等动物脑内培养技术)在20世纪80年代此前曾广泛应用于人狂犬病脑组织灭活疫苗生产,如sele、fer和het疫苗等。但是,随着细胞疫苗发展和神经组织疫苗使用安全问题,该技术已不再惯用。
1.2禽胚胎培养技术7-10
鸭胚培养技术过去重要用于人用狂犬病疫苗生产,当前在实验室使用较少。1955年,pe株适应细胞,用于疫苗生产。1967年,rieux研究所开始运用人二倍体体细胞进行疫苗研发。1974年,人二倍体细胞培养灭活疫苗在法国批准使用,1978年开始商业化生产。
2.1原代细胞培养技术
前苏联以狂犬病病毒vnukovo-32株感染原代地鼠肾细胞(ph),经紫外灭活后制备狂犬病疫苗,国内则以原代地鼠肾细胞(ph)培养狂犬病固定毒北京株,经甲醛灭活制备狂犬疫苗,重要用于暴露后治疗,其年需求量也相称大。
尚有某些类似疫苗是在原代胎牛
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